杏彩体育官网入口:过敏原检测的制作方法与工艺

　　相关申请的引用本申请要求以下申请的优先权：2014年7月18日提交的美国临时申请序列号62/026,361；2014年6月10日提交的美国临时申请序列号62/009,958；2014年5月9日提交的美国临时申请序列号61/991,068；2014年2月11日提交的美国临时申请序列号61/938,528；和2013年10月28日提交的美国临时申请序列号61/896,399；以上申请中的每一个的内容全文以引用方式并入本文。对序列表的引用本申请连同电子格式的序列表一起提交。序列表作为文件提供，所述文件标题为20661000PCT7SEQLST.txt，创建于2014年10月28日，大小为49,487字节。电子格式的序列表中的信息全文以引用方式并入本文。技术领域发明领域本发明涉及用于过敏原检测的方法、装置和分子。

　　发明背景过敏是影响世界范围内成百上千万人的严重医学病状，其中约1千5百万人在美国，包括许多儿童。在过敏反应期间，免疫系统错误地将过敏原作为威胁的目标，并且攻击它。过敏反应可以影响皮肤、消化系统、胃肠道、呼吸系统、循环系统和心血管系统；在一些过敏反应中，影响多个器官系统。过敏反应从轻微至严重或者危及生命。严重的症状可以包括呼吸困难、低血压、胸痛、意识丧失和过敏症。患有过敏的人目前通过避免可能含有特异性过敏原的食品来控制他们的过敏。这些限制对患者的生活品质具有重大影响，并且还没有用于评估食品的真实过敏原含量的方法。在美国，每三分钟就有某人因食品过敏症状被送至急救室。用于测定过敏原存在的快速方法将有巨大的益处。允许患者测试他们的食品并且精确且即时地测定过敏原含量的便携式装置将有益于提供是否要进食该食品的知情决定。McKay的美国专利第5,824,554号示教一种用于检测食品过敏原的餐垫，所述餐垫由吸收材料和施加至所述垫上的隔离区的化学试剂的小斑点形成。如果食品产品含有过敏原物质，化学试剂将改变其外观以表明食品产品中存在过敏原物质。检测限和检测特异性由斑点中使用的化学试剂限制。缺点是：当分析固体食品产品时，因为固体食品产品与斑点试剂之间的长反应时间，很可能是假的阴性。Jung等人的美国专利申请公开第2008/0182339号和美国专利8,617,903示教一种检测过敏原的方法，所述方法通过以下来进行：用被配置以用于分析一种或多种过敏原指示剂的微流控芯片处理样品，用一个或多个检测单元检测过敏原指示剂，和用一个或多个显示单元显示结果。检测系统包括微流控芯片、试剂递送单元、离心单元、分析单元、检测单元、显示单元和记录单元。装置并不充分紧凑，不便携带。Scott等人的美国专利申请公开第2010/0210033号示教一种用于检测食品过敏原的便携式装置，所述便携式装置包括壳体、样品入口、用于表明样品中存在潜在过敏原的器件和包含针对潜在过敏原的抗体的过敏原检测芯片，其中所述抗体用可检测的标签标记。Royds的美国专利第7,527,765号示教一种用于鉴定食品样品中有害污染物的存在的食品测试装置，所述食品测试装置包括一次性的样品容器、包括叶片部件的机械液化器、测试供应隔室，所述测试供应隔室具有对有害污染物有亲和性的试剂，并且所述测试供应隔室能够检测液化食品样品中的有害污染物并且一识别到有害污染物就产生视觉提示。适体以及装置和在检测食品蛋白质中使用它们的方法公开于若干专利和专利申请(所述专利和专利申请中的每一个全文均以引用方式并入本文)中，包括：Kim等人的美国专利第8,633,140号，其示教一种官能化聚丁二炔分子传感器的微阵列；Brunner等人的美国专利第8,618,046号，其示教一种用于使用基于适体的抗CETP抗体诱导抗原治疗动脉粥样硬化的方法；和Rasooly等人的美国专利第8,614,466号，其示教一种使用称为“电渗流”(通过无规电阻网络的电流)的物理原理电学检测半导体中的生物分子结合的方法和系统。在一个实施方案中，用于结合靶分子的捕获分子可以是适体。Lowery,Jr.等人的美国专利第8,563,298号示教用于分析物的收集和检测的NMR系统和方法。Yokota等人的美国专利第8,507,458号示教一种用于递送核酸以通过使用内源性乳糜微粒抑制靶基因表达的系统，其中所述核酸可以是适体。Herzog等人的美国专利第8,236,933号示教具有降低的肽YY(PYY)表达水平的转基因动物和使用所述转基因动物用于筛选适体库并且鉴定PYY的激动剂和拮抗剂的方法。Lieber等人的美国专利第8,232,584号示教一种用于检测分析物的基于荧光的纳米尺度线生物传感器装置和方法，其中适体可以相对于所述纳米尺度线间接固定。Hornbeck等人的美国专利第7,977,462号示教用于检测并且定量恶性上皮肿瘤(carcinoma)和/或白血病中鉴定的新酪氨酸磷酸化位点的横向流(lateralflow)装置。Mata等人的美国专利第7,973,079号示教用于检测可以调节血清视黄醇、视黄醇结合蛋白(RBP)和/或运甲状腺素蛋白(TTR)的活性或可用性的大分子及分析物的生物传感器。Gordon等人的美国专利第7,855,057号示教用于检测样品中的少量蛋白质异形体(例如，由于替代剪接的蛋白质异形体，或者不同疾病蛋白质异形体或降解产物)的方法、试剂和设备，包括使用捕获剂的组合，其中所述捕获剂可以为适体。Vukicevic等人的美国专利第7,850,964号示教用于诊断并且治疗骨和软组织的缺陷和病症的骨形态发生蛋白(BMP)(例如BMP-1溶胶原c-蛋白酶)的核酸生物传感器。Buchner等人的PCT公开WO2009/040113、WO2010/108657和WO2013/104540中描述了过敏毒素C5a-(互补因子5a)-结合适体。Buchner等人还在PCT公开WO2009/019007中描述了结合至CXC趋化因子基质细胞衍生因子-1(SDF-I)的适体。分子信标(MB)是含有荧光团和淬灭剂部分二者的发夹形状寡核苷酸，且其作用就像开关。当处于闭合状态时，荧光团和淬灭剂聚到一起并且通过共振能量转移猝灭(“关闭”)荧光。当构象变化打开发夹结构并且荧光团和淬灭剂分离时，淬灭剂不能再猝灭并且荧光被恢复(“打开”)。MB在需要探针具有高灵敏性和优异的分子识别特异性的检测装置和诊断测定中特别有用；MB是极其靶特异性的，忽略相差小至单个核苷酸的核酸目标序列。MB的优点为：(1)敏感性可以允许实时监控；(2)低背景信号允许大于200倍的荧光增强；(3)MB允许“无需分离的检测”，其中将探针-靶杂交体从过量的未杂交探针隔离是不可能或不希望的。由MB环-茎结构提供的特异性已经被证明可适用于各种生物环境中。本文公开的组成物、方法和装置可适用于基于溶液(体外)的RNA–DNA相互作用的研究、蛋白质-DNA相互作用研究、生命系统内的测量和生物传感器设计。例如，本文描述的组成物可用于体外研究，诸如在PCR期间DNA/RNA扩增的实时监控；用于临床诊断的快速并且可靠的突变检测(Xiao等人，.Ed.Engl.48(24):4354-4358)；光谱基因分型(Kostrikis等人，Science，1998，279:1228)；DNA粘端配对(SEP)分析；RNA的亚细胞定位和细胞运输途径的可视化(Tan等人，(2005)MolecularBeaconsforBioanalyticalApplications.Analyst130:1002-1005)。示例性分子信标在Leung等人，2011(NucleicAcidsResearch,2012,40(3):941–955)中述评，并且在以下专利中描述：Litman等人的美国专利第8,188,255号，其示教与癌症(cancer)有关的微RNA(miRNA)序列，和它们的使用适体和分子信标的检测；Meyers等人的美国专利第7,282,360号，其示教新蛋白激酶、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶、丝氨酸/苏氨酸磷酸酶、脯氨酰寡肽酶、胰蛋白酶、丝氨酸蛋白酶和泛素羧基末端水解酶家族成员，本文称作“53070、15985、26583、21953、m32404、14089和23436”并且使用适体或分子信标一般地公开了它们的检测；和Kapeller-Libermann等人的美国专利第6,730,491号，其示教三种据说新颖的蛋白激酶家族成员，本文称作“2504、15977和14760”并且使用适体或分子信标一般地公开了它们的检测。仍需要用于快速并且精确地检测过敏原的便携并且可重复使用的装置。还存在用单个装置检测多个过敏原的需求。

　　本发明提供用于各种类型样品中的过敏原检测的装置、方法和检测分子。本发明的一个方面为检测样品中的一种或多种过敏原的方法，所述方法包括以下步骤：(a)获得怀疑含有过敏原的样品，(b)用一种或多种缓冲剂消解(a)的样品，(c)用检测分子接触消解的样品，(d)用激发器件(excitationmeans)处理接触的样品，和(e)使检测分子和过敏原的相互作用可视化。本发明的另一方面为用于检测样品中的过敏原的装置。所述装置包括：主体，所述主体被配置以支撑以下组件：(a)用于收集和处理样品的筒夹；((b)用于提供荧光激发的器件；(c)用于过滤荧光发射的滤光器；(d)用于混合过敏原与检测分子的检测腔室；(e)用于检测荧光发射的检测器，所述检测器包括用于数字化检测信号的器件；和(f)用于接收检测信号并且显示过敏原的检测的显示窗口。附图说明上述及目的、特征和优点将由本发明的具体实施方案的以下说明变得明显，如附图中例示。示意性附图不必按比例。相反，重点在于例示某些操作原理。图1是根据本发明的一个实施方案的检测装置10的示意图。图2A是本发明的检测装置的另一实施方案中使用的筒夹1400的示意图，其示出将注射器柱塞1408下压到注射器1406的筒中时，筒夹内流体的流向。流体(消解缓冲剂D)通过单向阀1422注入到混合腔室1410中。图2B是图2A的相同筒夹1400的示意图，其示出将注射器柱塞1408从注射器1406的筒收回时，筒夹内流体的流向。流体通过第二单向阀1424从检测腔室1426抽回至注射器1406的筒。图3示出检测装置2000的另一实施方案，所述检测装置2000为沙漏的基本形状，所述沙漏具有设置在其前后突起部(分别为2015和2025)之间的抓握手柄2017。图4示出由信号多核苷酸SPN-A*200表示的检测分子的次级序列，所述信号多核苷酸SPN-A*200包括核心序列202、荧光团204、淬灭剂206和接头序列208。图5示出由发夹式信号多核苷酸SPN-E300表示的检测分子与其靶分子溶菌酶之间的反应。同样示出的是适体核心序列302、荧光团304和淬灭剂306。图6示出由二聚信号多核苷酸SPN-E*400表示的检测分子(包括退火接头序列408)与其靶分子溶菌酶之间的反应。同样示出的是适体核心序列402、荧光团404和淬灭剂406。图7A示出通用信号多核苷酸500与作为分子靶的溶菌酶之间的反应。信号多核苷酸500具有核心序列502，所述核心序列502具有连接的荧光团504。信号多核苷酸500还包括接头序列508，所述接头序列508具有连接的淬灭剂506。接头序列508退火到核心序列502，从而使淬灭剂506与荧光团504紧密接近。溶菌酶结合至核心序列502，生成具有发夹的次级结构，所述次级结构引起接头序列508释放，使得淬灭剂506不再猝灭荧光团504的荧光。图7B是通用发夹式信号多核苷酸600与作为分子靶的溶菌酶之间的反应。信号多核苷酸600具有核心序列602，所述核心序列602在5-端具有连接的荧光团，并且在3-端具有连接的淬灭剂606。核心序列602具有发夹区段，所述发夹区段使淬灭剂606足够接近荧光团604以猝灭荧光团604的荧光。溶菌酶结合至核心序列602破坏发夹结构，并且导致淬灭剂606移动远离荧光团60。